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流式細(xì)胞儀怎樣檢測(cè)細(xì)胞的周期

更新時(shí)間:2016-11-28瀏覽:3225次
   流式細(xì)胞術(shù),顧名思義,是研究細(xì)胞的一種技術(shù),但是它的研究對(duì)象不僅僅局限于真核細(xì)胞,還可以研究細(xì)菌、病毒以及各種蛋白等等。無論你是基礎(chǔ)科研工作者還是臨床醫(yī)生,都用得上這項(xiàng)技術(shù)。與之相關(guān)的儀器----式細(xì)胞
  通過流式細(xì)胞儀可分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù),來檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。
  流式細(xì)胞儀分析原理:通常用PI染細(xì)胞核,PI在一定波長的光下發(fā)出熒光,其強(qiáng)度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發(fā)光基團(tuán)也可作為標(biāo)記物,分選細(xì)胞。
  流式細(xì)胞儀測(cè)量方法:
  1)將細(xì)胞以1×106接種于60mm培養(yǎng)板,80%匯合后轉(zhuǎn)染。
  2)24小時(shí)后在新鮮培養(yǎng)液中加入適當(dāng)?shù)目股兀ㄕ婧吮磉_(dá)載體上的抗性標(biāo)記)進(jìn)行培養(yǎng)(該步可選)。
  3)48-72小時(shí)后用胰酶消化收集細(xì)胞,PBS洗兩遍,棄上清,加入1ml 70%預(yù)冷乙醇中,吹打均勻,4℃固定12小時(shí)以上。
  4)PBS洗滌去乙醇,1000rpm,5min,洗兩遍。
  5)0.5mlPBS重懸細(xì)胞,加入PI和RNaseA至終濃度50µg/ml,37℃溫浴30 min。
  6)用流式細(xì)胞儀測(cè)定周期。
  PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
  RNaseA:10mg/ml。
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